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细胞外囊泡提纯,选切向流、层析还是超离,我们帮你比了个高低(附实测数据)

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提细胞外囊泡(EVs),是不容易的。植物榨汁破壁后杂质多;动物组织,样本珍贵量少,一步操作失误全盘报废;细胞上清,面临超离、层析、切向流……方法选到头秃,纯度和得率永远在打架。

超离都说纯度高,可自己一转,沉淀里全是蛋白聚集体,得率太低;实验室级别的问题,无法初步标准化和规模化,用切向流,浓缩完一测,颗粒数也太少了;层析柱听着是高级,可纯化后样本稀稀拉拉……就算过了提取这一关,纯度够不够?颗粒损失大不大?后续实验能不能用?审稿人一句「请详细说明方法学依据」,就能让你改到崩溃。

这一次,宇玫博生物用一份扎扎实实的对比实验,一次性把这些问题讲透了。他们以 293T 细胞无血清上清为模型,系统对比了「切向流」、「切向流 + 层析」、「切向流 + 超离」三种分级提取工艺。不玩虚的,每一步都用NTA 粒径、TEM 电镜、BCA 蛋白浓度的实测数据说话——纯度高不高、颗粒丢没丢、成本划不划算,一目了然。

而且,宇玫博的大规模提取服务,远不止于细胞上清。植物样本(榨汁破壁)、动物组织(匀浆处理)、各类细胞上清,他们均有成熟的标准化工艺流程,可根据您的样本类型定制化提取验证,帮您绕开「样本不同、方法不适用」的坑。

更值得关注的是,基于这些标准化工艺,宇玫博还提供多种来源的外泌体/细胞外囊泡现货——均经过严格质检,批次稳定,即买即用,帮您省去方法开发的时间和试错成本。接下来,这份对比实验报告,将带你一次性看清:不同工艺路线,到底该怎么选。


一、分级策略:从高效富集到极致纯化

1

级别一:切向流

提取处理:将 293T 上清原液过 0.22 μm 滤膜后,使用 300K 中空纤维柱浓缩 10 倍,浓缩液过 0.22 μm 滤膜后即为「切向流」级提取产品;


2

级别二:切向流 + 层析

提取处理:

1. 将 293T 上清原液过 0.22 μm 滤膜后,使用 300K 中空纤维柱浓缩 10 倍,浓缩液过 0.22 μm 滤膜;

2. 过膜后浓缩液过层析柱,收集外泌体馏分;

3. 使用 300K 中空纤维柱将馏分浓缩 10 倍后过 0.22 μm 滤膜,得到高纯「切向流 + 层析」级别的外泌体产品。


3

级别三:切向流 + 超离

提取处理:

1. 将 293T 上清原液过 0.22 μm 滤膜后,使用 300K 中空纤维柱浓缩 10 倍,浓缩液过 0.22 μm 滤膜;

2. 过膜后的浓缩液 4℃,100,000 g 超离 120 min 后,用适量 PBS 重悬,重悬液过 0.22 μm 滤膜后得到「切向流 + 超离」级别的外泌体产品;


二、硬核数据对比:

所有工艺的性能,最终由数据说话。基于 293T 细胞上清的大规模提取实测数据,三级方案的差异一目了然:



293T 细胞上清三种级别的提取,得到的外泌体产品纯度均能达到 1.0E+08 个/mL 以上;

作为大规模提取的第一步,切向流步骤的蛋白去除率在 90% 以上,所以终产品的 BCA 都相对较低;

切向流去除了大量的蛋白和小颗粒的情况下,层析进一步去除部分蛋白,提高了产品纯度;

外泌体产品的 BCA 浓度与纯度不可兼得,强行浓缩会使颗粒损失增多;

对比上清原液与其他提取方法看,超离提取的外泌体体积较少,颗粒损失较高;

单独看超离提取得到的外泌体是质检合格的;

三、场景化选择指南:为您的需求精准匹配


注:以上数据基于 293T 细胞无血清上清实测。其他细胞上清(如干细胞上清、含血清培养上清)可根据需求提供定制化提取验证。

四、不止于指南:宇玫博(Umibio)能为您做更多

上面的选择指南是基于细胞上清,但如果您的研究样本是植物汁液、动物组织、中草药提取液呢?

宇玫博的大规模提取服务,正是为解决这类「非标样本」难题而设。从植物榨汁破壁到动物组织匀浆再到各类细胞上清,我们均开发了成熟的标准化工艺流程,可为您提供定制化的提取验证与全链条服务,帮您绕开「样本不同、方法不适用」的坑。

此外,如果您不想耗费数月时间在方法开发上,宇玫博还提供多种来源的外泌体/细胞外囊泡现货。所有产品均基于上述标准化工艺制备,经过严格的多维度质检,批次稳定、即买即用,助您跳过最磨人的提取阶段,直接聚焦下游功能实验。现识别下方二维码,可在线咨询沟通~

宇玫博(Umibio)分级提取方案,以清晰的工艺路径、扎实的实验数据和完善的表征体系,解决了外泌体制备中「纯度、得率、浓度」不可兼得的三角难题。研究者可根据明确的应用场景导向,选择最经济、最有效的制备路径,无需再为方法学选择而困扰。同时,宇玫博将这一技术体系延伸至植物、动物、细胞等多类样本的大规模提取服务,并提供标准化制备的现货外泌体产品,全方位助力外泌体研究从「提取」到「应用」的加速推进。选择宇玫博(Umibio),选择专业。让我们携手,从精准制备开始,驾驭外泌体的未来。

内容策划:王丹琦

内容审核:吴军

题图来源:图虫创意

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