Genome Biology | 华中农业大学谢为博团队开发单细胞遗传定位框架GAMETE，揭示水稻花粉中转座子沉默的松弛期与细胞类型特异调控

花粉发育调控直接关系到作物的育性与遗传传递，但其研究面临多重挑战。一方面，同一样品中的花粉处于不同发育阶段，一粒花粉内又含多种细胞类型，混合测序容易掩盖细胞特异的分子状态；另一方面，花粉相关性状的遗传分析通常依赖后代群体，不仅周期长，也难以追踪偏分离等遗传事件的发生阶段及其分子基础。单细胞技术虽能解析异质性，但其数据高度稀疏，又增加了基因型推断和遗传定位的难度。

近日，华中农业大学谢为博教授团队在GenomeBiology在线发表了题为"GAMETEmaps the genetic architecture of chromatin accessibility in rice pollen at single-nucleusresolution"的研究论文。该研究建立了单细胞遗传定位框架GAMETE，开发了适用于稀疏单细胞数据的遗传分析方法，实现了无需繁殖后代即可直接利用配子进行遗传定位、追踪偏分离最早出现的发育阶段，并大规模定位染色质可及性QTL、解析其细胞类型特异性。将GAMETE应用于杂交水稻汕优63花粉，研究还发现了小孢子中反转录转座子的异常开放，提示这一阶段表观沉默可能相对松弛，可能增加转座子逃逸抑制并产生可遗传新插入的机会，为理解转座子驱动的基因组大小演化提供了新的发育阶段线索。

MPS-ATAC-seq揭示反转录转座子在小孢子中异常开放

团队首先开发了多重板式单核ATAC-seq方法MPS-ATAC-seq，可一次实验灵活获取几百个到上万个细胞核的染色质可及性数据（图1）。用该方法最终获得4,887个高质量单倍体核的数据，经聚类对应到花粉发育的四类细胞：小孢子（MC）及其经不对称分裂产生的营养细胞（VC）和生殖细胞（GC），生殖细胞再分裂形成两个精细胞（SC）。

图1 MPS-ATAC-seq实验流程与花粉单核染色质可及性图谱

按照目前被广泛接受的模型，花粉营养细胞中的部分转座子会发生去抑制，并产生小RNA；这些小RNA可通过非细胞自主作用增强精细胞中的转座子沉默，从而保护传递给下一代的基因组。但群体基因组学研究发现，水稻品种间普遍存在转座子插入多态性，说明转座子在生殖过程中仍能找到活跃的机会。

团队起初用标准流程（比对质量MAPQ ≥ 30）分析了转座子区在不同细胞类型的染色质可及性，结果与经典模型的预期一致，营养细胞中转座子可及性相对更高（图2a）。但MAPQ ≥ 30会过滤多重比对读段，而转座子天然存在多个拷贝，因此会丢失大量转座子来源的信号。团队保留多重比对读段重新分析后，发现此前标准流程掩盖了小孢子转座子的开放信号（图2b）。进一步分类显示，逆转座子的高可及性主要出现在小孢子，尤其集中于gypsy类，而DNA转座子的高可及性则主要出现在营养细胞。有意思的是，小孢子中可及性最高的两个gypsy亚家族Os0039_RIRE3和Os0016，恰是近期被报道（Guo et al., Nature, 2025, 642: 662）对野生稻与栽培稻基因组大小差异贡献最大的两个亚家族（图2f）。

图2 不同细胞类型中转座子可及性的分布格局

发现小孢子阶段转座子“沉默松弛期”，为基因组演化研究提供新线索

分析表观沉默通路，可见明显的细胞类型差异：DCL3b、AGO4a和DRM2等小RNA介导DNA甲基化相关组分，在生殖细胞和精细胞中的染色质可及性较高，而在小孢子和营养细胞中相对较低；同时，DDM1、SDG728、CMT3和MET1等异染色质与甲基化维持因子，也在由小孢子向雄性生殖细胞分化的过程中总体增强（图3）。对已发表的花粉细胞类型RNA-seq数据的重分析也支持这些差异。

这些结果提示，小孢子可能处于转座子沉默相对松弛的发育阶段，部分Gypsy反转录转座子的染色质因而出现异常开放。与不参与遗传传递的营养细胞不同，小孢子将直接产生雄性生殖细胞，因此这个阶段可能增加部分反转录转座子逃逸监控并形成可遗传新插入的机会。这些结果为理解转座子驱动的基因组大小演化提供了新的发育阶段和细胞类型层面的线索。

图3 水稻花粉发育过程中小孢子可能处于表观沉默监控相对松弛的时期

绘制单细胞重组图谱，精准追踪偏分离的发生时期

汕优63是F1杂种，每一粒花粉都携带一份独特的亲本嵌合基因组。但单核数据里只有两成左右的读段覆盖到亲本多态位点，加上污染和测序错误，使直接进行可靠的单核基因分型极具挑战。团队利用隐马尔可夫模型从稀疏数据中重建单核基因型，并在4,887个花粉核中共识别到102,786个重组事件，进而构建了单细胞水平的重组图谱（图4）。

基于这张图谱，研究检出多个偏分离位点。其中第4染色体的位点与前人在F2群体中的结果吻合，定位区间大幅收窄。结合细胞类型注释逐群体检验后发现，部分偏分离早在小孢子阶段就已出现。依赖后代群体的传统分析无从知晓偏分离在哪一步发生，该研究因此"看到了传统遗传分析看不见的事"。

图4 单细胞基因型图谱构建与偏分离位点定位

把配子当作群体：一穗定位上万个 caQTL，解码细胞特异性遗传调控

由于杂交种每粒花粉的基因型不同，一个稻穗的花粉可构成天然的分离群体。团队据此提出动态混池分析（Dynamic-BSA）方法：把基因组切成小区间，在每个区间上只依据该位点的基因型将所有核动态划分为两个混池，再做全基因组差异可及性分析，遍历所有区间后得到"可及性区域×基因组区间"的关联矩阵，实现了稀疏数据的染色质可及性QTL（caQTL）定位（图5a）。

合并分析与分细胞类型分析共得到16,113个非冗余的caQTL，其中48.6%仅在特定细胞类型中出现（图5b）。研究还利用细胞类型分辨的数据训练深度学习模型，其从序列预测可及性的AUC超过0.93，为将定位区间解析到具体碱基提供了方法。

图5 Dynamic-BSA解析染色质可及性变异的遗传基础

回到开头：转座子可及性本身也受遗传控制

将每个核中转座子区来源读段的比例作为数量性状，采用Dynamic-BSA分析，可检验亲本间遗传差异是否参与其调控。研究在第11染色体上定位到一个与小孢子gypsy可及性显著关联的QTL（图5g）。这一结果为揭示花粉发育过程中转座子可及性变化的遗传调控提供了线索。

总之，GAMETE并不限于水稻花粉，任何存在基因型分离、且能获取单倍体配子的物种都可照此分析。而这项工作更值得延伸的一点，是把转座子扩张放到了具体的发育时刻上。如果小孢子阶段的这一开放窗口确实增加了逆转座子产生新插入的机会，那么不同物种中该窗口的强弱和持续时间是否与长期的基因组扩张速率相关？基因组扩张更剧烈的物种，其小孢子中的逆转座子是否具有更高的可及性甚至转座活性？这一假说未来可以通过跨物种单细胞表观组学与新生插入检测直接检验。

华中农业大学博士研究生刘茵梦为该论文第一作者，谢为博教授为通讯作者。该研究得到了邢永忠教授、余四斌教授和欧阳亦聃教授的重要帮助，获得了国家自然科学基金等资金的资助。

https://link.springer.com/article/10.1186/s13059-026-04226-4