J Ethnophar-IF6.8：南中医附院揭示疏肝通便方通过脑-肠轴改善伴焦虑抑郁的功能性便秘机制

✍导语

疏肝通便汤（SGTBD）的组成包括当归、白芍、白术、柴胡、茯苓、薄荷、生姜、炙甘草、党参、苏梗、香附、大枣、陈皮、炒谷芽、焦神曲，具有疏肝理气、健脾和胃通滞的功能，主治便秘，症见情志不遂、食欲不振、便前胁痛腹胀者，在缓解伴有焦虑和抑郁的便秘方面显示出潜在的疗效。一篇发表于Journal of Ethnopharmacology（IF：6.8）的研究从脑-肠轴新视角揭示了疏肝通便方干预伴焦虑抑郁的功能性便秘。

功能性便秘（FC）是一种慢性肠道疾病，其特征是多种因素，主要是排便困难、排便次数减少以及排空感不完全。许多FC患者患有精神和心理障碍，包括不同程度的抑郁、焦虑、失眠和认知功能障碍。与普通人群相比，慢性便秘（CC）患者中焦虑和抑郁的患病率更高。

PART 01

题目及作者信息

PART 02

文献摘要：

✂图文摘要

【研究目的】

FC正在增加，并且其与情绪障碍呈正相关，这些情绪障碍会影响患者的生活质量。研究SGTBD的脑和肠道保护作用，并利用网络药理学分析和实验验证探索其潜在的分子机制。

【材料与方法】

进行网络药理学分析，通过分析方法测定了SGTBD的成分，并利用高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）鉴定其主要化合物。通过化合物二苯氧乙酸与慢性不可预测轻度应激（CUMS）联合建立大鼠FC焦虑抑郁模型，以评估SGTBD对便秘及行为指标和病理变化（苏木精-伊红（HE）、蓝藻糖染料、过碘酸-雪夫（AB-PAS）和尼氏染色）的影响。通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测5-HT。通过Western blotting和透射电子显微镜评估线粒体损伤。使用WB和qRT-PCR评估SGTBD对Wnt/retromer通路的调控作用。

【结果】

SGTBD可能具有药理学作用，包括调节神经发育和氧化应激诱导的细胞凋亡。SGTBD显著改善了行为指标，减轻了便秘，并减轻了病理损伤。它抑制了线粒体未折叠蛋白反应（UPRᵐᵗ）并增强了神经递质。qRT-PCR、透射电镜（TEM）和WB结果表明，SGTBD可通过修复线粒体结构来抑制线粒体损伤，其中Wnt/Retromer信号通路在这一过程中起着关键作用。

【结论】

SGTBD调节脑肠轴的UPRᵐᵗ。它减少了线粒体损伤，并与恢复Wnt/Retromer通路的水平有关。这改善了脑肠轴的线粒体结构，为患有焦虑和抑郁的FC大鼠提供了多方面的保护作用。研究为开发保护措施和预防日常生活中患有情绪障碍和疾病患者的便秘提供了新的视角。

PART 03

研究思路与方法

研究思路：网络药理学预测→方药物质基础鉴定→复合动物模型构建→表型行为学→组织病理→超微电镜→分子通路验证→安全性评价

一表格拆解

模块

技术手段

实验目的

网络药理学

TCMSP、GeneCards、OMIM；PPI、GO/KEGG 富集

筛选复方活性成分、疾病交集靶点，预测关键通路

物质基础

UHPLC、MS/MS（正负离子模式）

定性识别复方主要化学成分：柚皮苷、阿魏酸、金丝桃苷、芦丁、甘草酸等黄酮、酚酸、生物碱类成分

动物造模

复方苯乙哌啶+CUMS-35d建立便秘合并焦虑抑郁大鼠模型；之后给药28d；设置低/中/高剂量SGTBD，阳性药（莫沙必利 +氟西汀）

体内实验分组

行为学评价

①便秘指标：粪便含水率、粪便粒数、首粒黑便时间、小肠推进率②情绪行为学：糖水偏好 SPT、旷场 OFT、

高架十字迷宫 EPM

评价便秘、焦虑抑郁样行为改善效果

组织病理

结肠HE、ABPAS；海马HE、尼氏染色

观察肠道黏膜损伤、杯状细胞；海马神经元损伤

情况

超微结构

透射电镜TEM

直接观察海马神经元、结肠组织线粒体形态、嵴结构是否完整

分子验证

WB、qRTPCR；ELISA检测结肠5-HT

检测Wnt/Retromer通路、UPRᵐᵗ通路（HSP60、CLpP、LONP、CHOP）蛋白与mRNA，检测神经递质 5-HT

安全性评价

脏器系数、血生化、

脏器HE染色

评价高剂量复方有无

肝肾心毒性

动物分组：对照组、模型组、阳性药组、SGTBD-L低剂量组 ：9.41 g/kg、SGTBD-M中剂量组：18.81 g/kg（人等效剂量）、SGTBD-H高剂量组： 37.62 g/kg；每组 n=8。

动物实验设计如图所示

注：引物序列

PART 04

核心亮点

• 把非细胞自主线粒体应激 UPRᵐᵗ引入脑肠轴的中药研究；

• 证实疏肝通便方通过Wnt/Retromer 信号轴，抑制脑、肠组织过度激活

  的 UPRᵐᵗ，同时修复线粒体结构，实现通便+改善焦虑抑郁双重效果；

• 证实复方提升结肠 5-HT 水平，保护结肠与海马组织病理损伤。

PART 05

研究结果

图1：SGTBT 的 HPLC-MS 组成分析

（A）阴离子模式下混合标准品的色谱图。（B）阴离子模式下 SGTBT 样品的色谱图。（C）阳离子模式下混合标准品的色谱图。（D）阳离子模式下 SGTBT 样品的色谱图。（E-M）从 SGTBD 中鉴定的九个组分的结构。

图2：SGTBD改善了联合CUMS诱导大鼠的总体状况、粪便水分含量和肠道推进速度

（A）各组大鼠在用药期间体重变化的趋势。（B）各组大鼠在用药期间24小时食物摄入量的趋势。（C）各组粪便含水量。（D）各组粪便颗粒数。（E）各组首次黑便排便时间。（F）各组小肠推进速度。  < 0.05, # < 0.01, ## < 0.001 vs the control group. *p < 0.05, ∗∗p < 0.01, ∗∗∗p < 0.001 vs the model group.

图3：SGTBD缓解了联合CUMS诱导大鼠的焦虑样和抑郁样行为

（A）开放场测试的总距离。（B）开放场测试的中心区域距离。（C）蔗糖偏好测试。（D）各组的开放场测试轨迹图。（E）新物体识别测试的总距离。（F）新物体识别测试的开放臂距离。（G）新物体识别测试中在开放臂停留的时间。（H）各组的新物体识别测试轨迹图。  < 0.05, # < 0.01, ## < 0.001 vs 对照组。*p < 0.05, ∗∗p < 0.01, ∗∗∗p < 0.001 vs the model group.

图4：SGTBD对联合CUMS诱导大鼠结肠和海马组织病理学的影响

（A）各组结肠组织的HE染色，红箭头表示炎症细胞浸润，黑箭头表示黏膜下水肿；（B）各组结肠组织的AB-PAS染色；（C）各组海马组织的HE染色，蓝箭头表示神经元紊乱，绿箭头表示细胞核萎缩；（D）各组海马组织的尼氏染色；（E）肠黏液的数量；（F）海马神经元的数量； < 0.05, # < 0.01, ## < 0.001 vs the control group. *p < 0.05, ∗∗∗p < 0.01, ∗∗∗p < 0.001 vs the model group.

图5：SGTBD 可减少线粒体损伤并改善线粒体结构

(A) 海马神经元超微结构的代表性透射电子显微镜图像。(B) 结肠组织超微结构的代表性透射电子显微镜图像。

图6：SGTBD和FC伴焦虑抑郁的药理网络分析

(A) SGTBD处方成分组成。多层环形图直观展示了配方的组成和草药属性。最外层环用于识别组成草药，随后的环依次编码每种草药的味、性、归经及绝对剂量信息。最后，最内层环及其分段区域展示了每种草药的相对剂量比例。(B) SGTBD靶点与伴抑郁和焦虑的靶点之间通过维恩图进行的比较。(C) SGTBD与伴焦虑抑郁的FC之间的“成分-靶点”网络。(D) 交叉的基因靶点被绘制到相应的蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络图中。(E) 网络药理学KEGG富集分析结果，以及 (F) 气泡图展示了共同靶点的GO富集分析，包括生物过程（BP）、细胞组分（CC）和分子功能（MF）。

图7：SGTBD通过恢复Wnt/Retromer通路的水平调节了FC伴抑郁和焦虑大鼠的海马线粒体应激

（A）Wnt/Retromer信号通路的蛋白质水平；（B）UPRᵐᵗ信号通路的蛋白质水平；（C）Wnt/Retromer信号通路的mRNA水平；（D）UPRmt信号通路的mRNA水平；# p < 0.05, ## p < 0.01, ### p < 0.001 vs 对照组。

图8：脑-肠轴介导的抑郁和焦虑大鼠中SGTBD调节的结肠5-HT水平与线粒体应激

(A) Wnt通路的蛋白水平；(B) UPRᵐᵗ 信号通路的蛋白水平；(C) qRT-PCR显示Wnt通路的mRNA水平；(D) UPRmt信号通路的mRNA水平；(E) ELISA显示5-HT水平；  < 0.05, # < 0.01, ## < 0.001 vs 对照组。*p < 0.05, ∗∗p < 0.01, ∗∗∗p < 0.001 vs the model group.

图9：SGTBD与CUMS诱导大鼠联合使用时安全性评价

（A）器官系数；（B）血液生化浓度；（C）两组心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏的HE染色。

PART 06

结论

结果表明，SGTBD在焦虑和抑郁伴随的FC后对线粒体未折叠蛋白反应的能力可能与Wnt/Retromer通路的恢复相关。在实验室条件下，SGTBD通过恢复Wnt表达，调节了联合CUMS诱导大鼠模型的海马和肠道UPRᵐᵗ。此外，SGTBD增加了结肠的5-HT表达水平。本研究表明，SGTBD通过恢复Wnt/Retromer通路的水平，调节了焦虑和抑郁伴随的FC大鼠的海马和肠道UPRᵐᵗ。

一句话总结机制解析

疏肝通便方通过下调Wnt/Retromer信号，抑制脑肠组织异常升高的线粒体未折叠蛋白反应UPRᵐᵗ，修复线粒体结构；同时提升肠道5-HT，实现既改善便秘，又缓解焦虑抑郁。

一图概括

科研启示｜这篇文章值得我们借鉴的思路

1.脑肠轴研究开辟新靶点：线粒体应激UPRᵐᵗ多数中药脑肠轴文章集中菌群、5-HT、炎症；本篇引入非细胞自主线粒体应激（神经元向肠道传递损伤信号），是非常新颖的切入点，为肝郁病类复方提供新思路。

2.贴合中医理论：疏肝不仅仅调节情绪，同时改善肠道器质性损伤“疏肝通便” 不是抽象概念，本研究提示：疏肝类复方可以同时保护中枢海马神经元+外周结肠组织线粒体稳态，解释“调情志以通大便” 的物质基础。

3.干湿结合完整证据链： 方 药指纹鉴定→网络药理预测→动物表型→行为学→病理→电镜超微结构→分子通路→安全性，整套完整 。

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