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人生长激素释放因子(GH-RF)ELISA Kit
供应商：深圳市恒昊生物科技有限公司
人生长激素释放因子（Growth Hormone-Releasing Factor，简称GH-RF，也常被称为生长激素释放激素GHRH）是下丘脑分泌的核心神经肽之一，通过特异性作用于垂体前叶生长激素分泌细胞，调控生长激素（GH）的合成与释放，在生长发育、代谢调节、衰老进程等生理过程中发挥关键作用。GH-RF ELISA Kit是专门用于定量检测人血清、血浆、脑脊液、细胞培养上清等生物样本中GH-RF含量的标准化免疫学检测工具，在儿童生长发育异常筛查、垂体功能评估、内分泌疾病研究及相关药物研发领域应用广泛。
注意事项
GH-RF属于体内含量极低的微量神经肽，其检测结果的准确性高度依赖操作的规范性，需重点关注以下环节：
（一）样本采集与预处理环节
- 样本类型规范处理
- 血清样本：建议使用无热源、无内毒素的采血管采集静脉血，室温静置30min待血液自然凝固后，1000×g 4℃离心15min分离血清，避免溶血（溶血会导致红细胞内肽酶释放降解GH-RF，造成结果偏低）。
- 血浆样本：优先选用EDTA作为抗凝剂（肝素、枸橼酸钠抗凝可能影响抗原抗体结合），采集后立即1000×g 4℃离心15min分离血浆。
- 脑脊液样本：采集后需立即冰浴，10000×g 4℃离心10min去除细胞沉淀后取上清检测。
- 细胞培养上清样本：收集后3000×g离心10min去除细胞碎片，取澄清上清检测。
样本保存规范：分离后的样本若24h内可完成检测，可置于2-8℃暂存；若需长期保存需分装为50-100μL/管，置于-80℃冰箱冻存，禁止反复冻融（反复冻融会导致GH-RF蛋白降解，检测结果最高可偏低30%以上）。
不合格样本排除：严重脂血、黄疸、微生物污染的样本会增加非特异性结合，导致本底偏高，不建议用于检测。
（二）试剂准备环节
- 试剂盒需在2-8℃避光密封保存，禁止冷冻，有效期内使用。实验前需提前30-60min将试剂盒从冷藏环境取出，平衡至室温（20-25℃）后再操作，温度差异会导致抗原抗体结合速率不一致，造成孔间CV值偏大。
- 浓缩洗涤液使用前需用蒸馏水或去离子水按说明书比例准确稀释，若浓缩液出现结晶，可置于37℃水浴至结晶完全溶解后再稀释，洗涤液浓度不足会导致洗板不充分、本底升高。
- 不同批号试剂盒的试剂不可交叉混用，拆封后的试剂建议在1个月内使用完毕，避免生物素化抗体或酶标记物失活。
（三）加样与反应环节
- 加样时需一次性更换枪头，避免样本交叉污染；加样过程中避免液体溅出或产生气泡，气泡会干扰后续酶标仪读数，造成结果偏差。
- 孵育过程严格遵循说明书要求的温度与时间，通常为37℃避光保湿孵育，孵育时需使用封板膜封闭微孔板，避免液体蒸发导致试剂浓缩；若环境温度低于20℃，建议使用恒温水浴箱或孵箱保证反应温度稳定。
- 洗板是控制非特异性结合的关键步骤：每孔需加满洗涤液，浸泡30-60s后彻底弃去，重复操作3-5次（不可随意减少洗涤次数），最后一次洗板后需将微孔板倒扣在吸水纸上拍干残余液体，避免孔内残留洗涤液稀释后续反应试剂。
（四）显色与读数环节
- TMB底物液需现用现配，且全程避光保存，若底物液使用前已呈现蓝色，说明已被氧化失效，禁止使用。
- 终止反应时间需严格把控，当标准品高浓度孔呈现明显深蓝色、低浓度孔梯度清晰时即可加入终止液，提前终止会导致显色不充分、结果偏低，延后终止会导致本底升高、低浓度样本检测误差增大。
- 加入终止液后需轻轻震荡微孔板使反应体系混匀，15min内完成450nm波长吸光度检测，超时会导致有色产物降解，吸光度值下降。
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