人白介素1β (IL-1β)ELISA Kit说明书

人白介素1β (IL-1β)ELISA Kit

作者：深圳市恒昊生物科技有限公司

人白介素1家族包含IL-1α、IL-1β、IL-1RA等多个成员，其中IL-1β主要由活化的单核巨噬细胞、树突状细胞、内皮细胞等细胞分泌产生。它可以通过激活免疫细胞、诱导促炎因子表达、升高体温等方式，帮助机体抵御病原体入侵；但当IL-1β表达异常升高时，会引发过度炎症反应，造成组织损伤。因此准确定量检测血液、细胞培养上清等样本中的IL-1β含量，对疾病诊断、病情监测、药物疗效评估以及基础医学研究都有着重要意义。
注意事项

ELISA实验的结果受样本处理、试剂操作、环境条件等多种因素影响，想要获得稳定准确的结果，需要注意以下几方面要点：

（一）试剂与样本准备

1. 试剂储存：试剂盒未开封时需要在2-8℃避光保存，不能冷冻；开封后，微孔板需要放入密封袋中，避免受潮污染，标准品、抗体、底物等试剂需要按照说明书要求储存，底物液要注意避免接触金属离子和强光，否则会提前氧化变质影响结果。
2. 试剂复温：实验前所有试剂都需要提前从冰箱取出，放置至室温（20-25℃）再使用，如果温度不达标，会影响抗原抗体的结合速率，最终导致标准曲线偏移、结果误差。
3. 样本处理

• 血清/血浆样本：采集后需要尽快分离，避免反复冻融，反复冻融会导致IL-1β降解，使得检测结果偏低，如果短时间不检测需要分装后放在-80℃保存；不能使用溶血样本，溶血会释放出血红蛋白等杂质，干扰酶促反应，造成OD值升高，出现假阳性。
• 细胞培养上清样本：需要去除细胞碎片和沉淀，离心后取上清检测，如果样本中IL-1β浓度超出试剂盒检测范围，需要用样本稀释液适当稀释后再检测，否则会出现“钩状效应”，导致结果低于实际浓度。

（二）实验操作环节

1. 加样：加样时需要注意不要将液体加到孔壁外，也不要触碰孔壁，避免交叉污染；每加完一个样本要更换枪头，标准品和样本建议设置复孔，减少操作误差；加样时间尽量控制在10分钟以内，如果加样太慢，会导致先加样的孔和后加样的孔反应时间不一致，结果出现偏差。
2. 洗板：洗板是去除未结合物质、降低背景噪音的关键步骤，必须严格按照说明书操作；手工洗板时，要保证每孔都注满洗液，浸泡30秒左右再拍干，不要漏洗；如果洗板次数不足，残留的未结合酶会导致背景升高，结果假阳性。
3. 孵育：孵育的温度和时间必须严格遵循说明书要求，孵育过程要注意密封微孔板，避免液体蒸发；温度过高或者孵育时间过长，会导致非特异性结合增加，背景升高；温度过低、时间不足则会导致结合不完全，结果偏低。
4. 显色与终止：底物显色需要在避光条件下进行，观察标准品的显色梯度，当出现明显的蓝色梯度后就可以加终止液，不要超时显色；终止液需要准确加入，所有孔加完终止液后要尽快在15分钟内读取OD值，放置时间过长，产物会逐渐褪色，导致读数偏低。

（三）结果判断与其他注意事项

1. 标准曲线：标准品浓度的选择要覆盖待测样本的预估浓度，绘制标准曲线时建议选择四参数拟合，比直线拟合的准确度更高；如果标准曲线的相关系数低于0.99，说明实验操作存在误差，需要重新实验。
2. 避免污染：所有耗材都需要使用一次性无酶处理的耗材，避免微生物污染，微生物会分泌蛋白酶降解IL-1β，也会干扰酶促反应。
3. 实验室环境：实验环境温度需要保持稳定，尽量在20-25℃的室温下操作，夏季高温或者冬季低温都会影响抗原抗体结合和酶促反应速率，导致结果不稳定。

ELISA实验的结果受样本处理、试剂操作、环境条件等多种因素影响，想要获得稳定准确的结果，需要注意以下几方面要点：

（一）试剂与样本准备

1. 试剂储存：试剂盒未开封时需要在2-8℃避光保存，不能冷冻；开封后，微孔板需要放入密封袋中，避免受潮污染，标准品、抗体、底物等试剂需要按照说明书要求储存，底物液要注意避免接触金属离子和强光，否则会提前氧化变质影响结果。
2. 试剂复温：实验前所有试剂都需要提前从冰箱取出，放置至室温（20-25℃）再使用，如果温度不达标，会影响抗原抗体的结合速率，最终导致标准曲线偏移、结果误差。
3. 样本处理

• 血清/血浆样本：采集后需要尽快分离，避免反复冻融，反复冻融会导致IL-1β降解，使得检测结果偏低，如果短时间不检测需要分装后放在-80℃保存；不能使用溶血样本，溶血会释放出血红蛋白等杂质，干扰酶促反应，造成OD值升高，出现假阳性。
• 细胞培养上清样本：需要去除细胞碎片和沉淀，离心后取上清检测，如果样本中IL-1β浓度超出试剂盒检测范围，需要用样本稀释液适当稀释后再检测，否则会出现“钩状效应”，导致结果低于实际浓度。