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人血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA kit
作者：深圳市恒昊生物科技有限公司
什么是人血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA Kit
人VCAM-1/CD106 ELISA Kit是基于抗原抗体特异性结合原理开发的酶联免疫吸附检测试剂盒，可准确定量血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等生物样本中可溶性VCAM-1的浓度，广泛应用于心血管疾病、自身免疫病、炎症性疾病、肿瘤转移等领域的研究与辅助诊断。
VCAM-1本身属于免疫球蛋白超家族跨膜糖蛋白，生理状态下仅在血管内皮细胞低表达，当受到TNF-α、IL-1β等炎症因子刺激时表达量显著上调，可通过蛋白水解作用释放到血液中形成可溶性VCAM-1。其核心功能是结合免疫细胞表面的配体VLA-4，介导单核细胞、T淋巴细胞等炎症细胞向血管内皮粘附、迁移，是炎症反应、动脉粥样硬化斑块形成、自身免疫病组织损伤的关键分子。研究证实，血清中VCAM-1的浓度与动脉粥样硬化进展、类风湿关节炎活动度、系统性红斑狼疮病情严重程度、肿瘤侵袭能力高度相关，是重要的疾病预后与疗效评估标志物。
注意事项
想要获得准确、可重复的检测结果，实验过程中需要注意以下要点：
（一）样本处理与保存
- 不同类型样本处理方法不同：
- 血清样本：采集后室温静置自然凝固，2小时内离心分离血清，及时检测；若需长期保存需分装后置于-20℃或-80℃冰箱，避免反复冻融，反复冻融会导致蛋白降解，造成检测结果偏低。
- 血浆样本：推荐使用EDTA或肝素抗凝，避免使用柠檬酸钠等可能影响抗原抗体结合的抗凝剂，采集后1小时内离心分离血浆，保存方式同血清。
- 细胞培养上清：离心去除细胞碎片和杂质后取上清即可检测，若有沉淀需再次离心后取上清检测。
- 组织匀浆：加入PBS（pH7.2-7.4）进行充分研磨破碎，离心后取上清检测，避免组织残留堵塞微孔影响反应。
待测样本如果浓度超出试剂盒的检测范围，需要用样本稀释液做适当稀释后再检测，否则会出现“钩状效应”，导致结果不准确。
（二）试剂准备
- 试剂盒从冰箱取出后，需要室温（20-25℃）平衡至少30分钟，让试剂温度恢复至室温，否则会影响反应效率，导致标准曲线偏差。未使用的试剂需要及时放回2-8℃冰箱保存，酶标抗体需要避光保存。
- 浓缩洗涤液需要用去离子水或双蒸水按比例稀释，如果室温较低时浓缩洗涤液可能会有结晶，需要提前温水浴溶解结晶后再稀释，避免盐浓度不准影响洗涤效果。
- 标准品需要现用现配，不要提前配制后放置，避免标准品降解影响定量准确性。
（三）操作过程
- 加样过程中要更换枪头，避免样本之间交叉污染，加样时尽量将样本加在酶标板孔底部，不要溅出孔外，也不要产生气泡，否则会导致吸光度检测偏差。
- 洗涤步骤是降低背景值、避免假阳性的关键，必须严格按照说明书要求的次数和时间洗涤，洗板后要在吸水纸上充分拍干孔内残留的液体，不要让残留的洗涤液影响后续反应。如果是手工洗板，过程中不要让孔干板，干板会导致固相抗体失活，结果失效。
- 孵育温度和时间要严格遵循说明书要求，一般室温孵育需要保证环境温度稳定，不要温度波动过大，显色过程可以避光进行，避免显色过度影响结果。
- 加入终止液后需要在15分钟内完成吸光度检测，时间过长会出现吸光度下降，导致定量结果偏低。
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