只因 WB 图！这篇被引 2500 次的阿尔茨海默病里程碑论文，遭 Nature 撤稿

震动神经科学界的撤稿

2024 年，一篇发表于 Nature、被引近 2,500 次的阿尔茨海默病里程碑论文被正式撤回，成为史上被引次数最高的撤稿论文之一[1]。

这篇发表于 2006 年的研究曾提出，一种名为 Aβ*56 的特定淀粉样蛋白聚集物会损害记忆，为阿尔茨海默病指出了一个「更具特异性」的治疗靶点，由此吸引了海量关注与科研经费。然而后续调查发现，论文存在图像篡改问题，通讯作者承认负有最终责任并同意撤稿。十余年间，一条可能被「修饰」过的条带，深刻左右了整个领域的研究方向。

这场风波让无数实验室后背发凉，它击中了一个最日常、也最容易被忽视的环节——Western Blot 的条带与定量。在神经退行性疾病研究中，Aβ、Tau、磷酸化 Tau、APP 及其剪切片段、自噬标志物……几乎每一个核心结论都依赖蛋白印迹。而一张图能否经得起推敲，往往取决于一个看似不起眼的问题：你用什么来做上样归一化（loading control）？

传统内参的「软肋」，恰恰在神经退行性研究中被放大

长期以来，β-actin、GAPDH、tubulin 这类「管家蛋白」是 Western Blot 默认的内参。但它们的局限早已不是秘密：

表达并非恒定：在疾病进展、衰老、药物处理等条件下，管家蛋白本身的表达可能发生变化——而神经退行性研究恰恰充满了「老龄 vs 年轻」「转基因 vs 野生型」「给药 vs 对照」这类对比。

线性范围窄、易饱和：常规上样量下，高丰度的管家蛋白条带容易过曝饱和，导致定量失真。

单条带、可追溯性弱：一条孤立的内参带，难以反映整条泳道的真实上样情况，在数据审查时也更难自证清白。

换句话说，当研究的可信度被放在放大镜下审视时，单一管家蛋白内参既不够「稳」，也不够「透明」。

更稳的做法：Stain-Free 总蛋白归一化

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近年来，Journal of Biological Chemistry 等期刊和大量方法学指南越来越推荐用总蛋白归一化（Total Protein Normalization）取代或补充单一内参。其中，Bio-Rad Stain-Free 技术因其简单、快速、可追溯，已成为主流方案。其逻辑十分直接：

检测的是整条泳道的总蛋白信号，而非单一条带，覆盖宽分子量范围，几乎不受单个蛋白随疾病波动的影响；

动态范围宽、不易饱和，定量结果更具线性、更可靠；

凝胶经 UV 快速激活即可成像，转膜后还能直接验证膜上总蛋白与转印效率；

总蛋白图来自样本本身、可全程留档——这正是数据完整性时代审稿人和期刊最为看重的「透明」与「可复现」。

三篇 2026 年顶刊，给出了同一个「双保险」答案

值得注意的是，最新一批高水平神经退行性研究，并未在「传统内参」和「Stain-Free」之间二选一，而是两者并用、相互印证。

1、唐氏综合征相关阿尔茨海默病新模型（Alzheimer’s & Dementia, 2026）[2]

研究团队构建了两种 Aβ 人源化的 DS-AD 小鼠模型。在分析 APP 及其 C 端片段时，他们使用β-actin 作为内参；而在定量 Tau、磷酸化 Tau、DYRK1A 及自噬通路（LC3、p62、mTOR、ULK1 等）这一大批关键蛋白时，则采用TGX Stain-Free 凝胶 + ChemiDoc MP 成像系统，并明确写道：利用 Stain-Free 技术「以整条泳道总蛋白密度作为上样对照」，磷酸化 Tau 数据均归一化至总蛋白上样量。

2、FKBP51 抑制剂 SAFit2 治疗 Tau 病变（Alzheimer’s Research & Therapy, 2026）[3]

在 PS19 Tau 转基因小鼠研究中，团队使用Stain-Free 凝胶分离蛋白，目标蛋白信号按Stain-Free 总蛋白上样量归一化；而对于完全变性的免疫印迹，则改用 β-actin 归一化作为补充。从单体到高分子量多聚体 Tau 的精细定量，正是建立在 Stain-Free 总蛋白归一化之上，并由 ChemiDoc 成像系统与 Image Lab 软件协同完成。

3、血管生成素（ANG）在阿尔茨海默病中的性别特异性调控（Molecular Psychiatry, 2026）[4]

研究中，细胞实验模型（HEK293 细胞）采用 WB 技术对 ANG 蛋白以 β-Actin为内参进行定量；而在人体组织样本中，检测炎症小体关键蛋白 NLRP1、NLRP3 时，作者则将条带强度归一化至每个样本的总蛋白量，并采用 Stain-Free 技术完成定量。总蛋白归一化相较传统内参能够获得更为准确的定量结果：在同一篇论文中，传统内参与总蛋白归一化各司其职、互相校验。

为什么「传统内参 + Stain-Free」会成为新共识？

将这三篇顶刊研究放在一起比较，规律十分清晰——在同一维度上，两种方法各有定位：

二者并非互斥，而是互补：总蛋白归一化负责「稳定性」与「透明度」，传统内参提供熟悉的横向参照与交叉验证。对于横跨多基因型、多年龄、多给药条件的神经退行性研究而言，这种「双保险」既提升了定量结果的可靠性，也让每一张图都更经得起同行评议与期刊的反复审视。

在「数据可信度」被重新定义的时代

Aβ*56 的撤稿提醒整个领域：一个被质疑的条带，足以让十八年的努力蒙上阴影。而提升 Western Blot 可信度的起点，往往就是把上样归一化做对、做透明。

Bio-RadStain-Free 全流程方案——从 TGX Stain-Free / Any kD Stain-Free 预制胶，到 ChemiDoc 系列成像系统与 Image Lab 软件——正在被越来越多顶刊研究采用，帮助科研人员：

在转膜前后即可对整条泳道总蛋白可视化、可量化分析；

以更宽的线性范围获得可靠定量结果；

留存可追溯、可复现的原始记录，从容应对日益严格的数据完整性审查。

让每一条带都站得住脚，让每一个结论都经得起时间检验。

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注：

1. 相关产品仅限科研使用，不作为临床诊断。

2. Bio-Rad 为 Bio-Rad Laboratories, Inc. 在特定区域的商标。本文所使用的所有商标均归其各自所有者所有。© 2026 Bio-Rad Laboratories, Inc.

3. 本活动的最终解释权归伯乐生命医学产品（上海）有限公司。

内容策划：沈佳钰

内容审核：周育红

题图来源：参考文献[1]

参考文献

[1]. https://www.nature.com/articles/nature04533

[2]. Age-related behavioral and molecular landmarks in new mouse models for studying Alzheimer’s disease in Down syndrome. Alzheimer’s & Dementia, 2026.

[3]. FKBP51 inhibition by SAFit2 modulates tau pathology and cognitive deficits in PS19 mice. Alzheimer’s Research & Therapy, 2026.

[4]. Sex-specific regulation of angiogenin in Alzheimer’s disease. Molecular Psychiatry, 2026.