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人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)ELISA Kit
提供商：深圳市恒昊生物科技有限公司
什么是人TRANCE ELISA Kit
TRANCE（TNF-related activation-induced cytokine，肿瘤坏死因子相关激活诱导因子）是一种跨膜蛋白，可通过蛋白酶切割形成可溶性形式进入体液循环，在破骨细胞活化、淋巴结发育、免疫系统调控中发挥不可替代的作用：在骨组织中，TRANCE结合破骨细胞表面的RANK受体后，可激活破骨细胞促进骨吸收，其表达异常与骨质疏松症、类风湿性关节炎骨破坏等骨病密切相关；在肿瘤研究中，TRANCE也被发现参与肿瘤微环境调控，影响肿瘤细胞的侵袭与转移能力。
注意事项
TRANCE检测结果的准确性高度依赖规范的实验操作，以下几个环节需要重点注意：
（一）样本制备环节
- 不同类型样本需遵循对应的处理规范：
- 血清样本：采集后建议室温静置30min待血液自然凝固，之后1000×g离心15分钟分离血清，尽早检测，若无法及时检测需要分装后置于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融，反复冻融会导致TRANCE蛋白降解，造成结果偏低。
- 血浆样本：建议使用EDTA或肝素作为抗凝剂，采集后1000×g离心15分钟分离血浆，保存条件同血清一致。
- 细胞培养上清样本：需要离心去除细胞碎片后取上清检测，若有沉淀需要再次离心后取澄清液体，避免杂质干扰反应。
样本若存在污染、严重溶血或者高血脂，会导致非特异性结合增加，出现结果偏差，这类样本不建议进行检测。
（二）试剂准备环节
- 试剂盒一般需要在2-8℃避光保存，有效期内使用，使用前需要提前将试剂盒从冷藏环境取出，平衡至室温（20-25℃）再进行实验，温度不均会导致反应速率不一致，造成孔间差异。
- 稀释标准品、洗涤液时需要使用去离子水或者蒸馏水准确配置，配置洗涤液时若出现结晶，需要提前摇匀溶解后再使用，浓度不准确的洗涤液会影响洗涤效果，造成本底偏高。
- 不同批号试剂盒的试剂不可混用，试剂拆封后建议在1个月内用完，避免试剂失活影响结果。
（三）加样与反应环节
- 加样时需要注意更换枪头，避免样本交叉污染，加样过程中尽量避免液体溅出、产生气泡，气泡会影响酶标仪读数，导致结果误差。
- 孵育过程需要严格控制时间和温度，按照说明书要求的温度（一般为37℃孵育）保湿孵育，孵育过程中如果环境温度过低，会导致抗原抗体结合不充分，结果偏低。若试剂盒要求封闭孵育，需要封板后再孵育，避免液体蒸发。
- 洗涤环节是降低本底、减少非特异性结合的关键：每一步洗涤都要保证洗涤液完全充满每一个孔，浸泡时间足够，洗涤次数不能随意减少，拍板时要保证将孔内残余液体彻底拍干，但不要让孔间的污染物相互交叉污染。
（四）显色与读数环节
- 底物液需要在使用前再配制，并且要避光保存，避免底物提前氧化显色，影响结果。若底物液出现蓝色说明已经失效，需要更换。
- 终止反应的时间需要严格把控，当标准品出现明显的颜色梯度后就可以加入终止液，不要提前或大幅延后终止，提前终止会导致显色不充分，延后终止会使本底升高。加入终止液后需要轻轻晃动微孔板混匀，保证反应彻底终止，15分钟内放入酶标仪读数，超时会导致吸光度变化。
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