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人可溶性CD28(sCD28)ELISA Kit
作者：深圳市恒昊生物科技有限公司
什么是人可溶性CD28（sCD28）
CD28是表达于T细胞表面的重要共刺激分子，在T细胞活化、增殖以及免疫应答启动过程中发挥着不可替代的核心作用。当CD28分子被蛋白酶水解切割后，胞外段会脱落进入体液循环，由此产生可溶性CD28，即sCD28。
人sCD28保留了与配体结合的能力，可通过竞争性结合CD80/CD86配体，调控T细胞的活化程度，参与自身免疫病、肿瘤、感染等多种疾病的发生发展过程。现有研究表明：系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等自身免疫病患者体内sCD28水平显著升高，而部分实体肿瘤患者的血清sCD28水平与肿瘤进展、预后密切相关，因此sCD28也成为临床免疫研究和疾病辅助诊断的重要生物标志物。
检测注意事项
（一）试剂盒保存与试剂准备
- 未开封的试剂盒需要在2-8℃冷藏保存，不可冷冻，避免试剂失活；标准品、显色液需要避光保存；
- 不同批次试剂盒的组分不可交叉混用，不同厂家试剂盒的试剂成分存在差异，混用会导致检测结果偏差；
- 浓缩洗涤液在低温下可能会析出结晶，稀释前需要充分摇匀，结晶完全溶解后再使用，不影响检测效果。
（二）样本处理相关
- 样本采集后需要尽早处理：血清样本建议采集后30分钟内分离，血浆样本采用EDTA或肝素抗凝，分离后2-8℃保存不超过24小时，长期保存需要置于-20℃或-80℃，避免反复冻融，反复冻融会导致sCD28降解，造成结果偏低；
- 若样本中存在严重的溶血、脂浊，会干扰显色反应，造成OD值异常，这类样本建议重新采集；
- 若预估样本sCD28浓度超出试剂盒的检测上限，必须提前稀释，避免结果出现hook效应（高剂量钩状效应），导致检测结果低于实际浓度。
（三）操作过程误差控制
- 加样时需要使用一次性吸头，避免交叉污染，加样后轻晃酶标板使样本混匀，避免贴壁加样产生气泡；
- 洗涤步骤是降低本底、减少非特异性结合的关键：洗涤时要保证每孔都加满洗涤液，拍干时注意不要让不同孔的液体交叉污染，若手工洗板，需要严格按照次数操作，避免洗涤不充分导致本底偏高；
- 显色过程需要避光，温度和时间对显色结果影响较大：严格控制孵育温度和显色时间，当最高浓度标准孔显色深度合适即可终止，不要过度显色。
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