庆大霉素是临床常用的氨基糖苷类抗生素,对革兰氏阴性菌感染疗效确切,但肾毒性限制了它的长期使用。活性氧在肾脏损伤中扮演了重要角色,庆大霉素诱导的肾小管毒性过程中存在氧化应激。当活性氧过量产生、超出抗氧化防御机制时,细胞氧化还原平衡被打破,导致细胞结构破坏和死亡。氨基糖苷类药物正是通过刺激肾细胞产生活性氧来发挥毒性作用。此外,细胞凋亡也是庆大霉素导致肾损伤的主要机制之一,p53通过与bcl-2相互作用成为庆大霉素诱导凋亡的重要介导因子。核因子红细胞相关因子2/抗氧化反应元件通路是在转录水平激活Ⅱ期解毒酶来应对活性氧的主要通路,该通路的激活是对抗氧化应激的核心防御机制之一。
瑞香素是从瑞香属植物中分离的天然香豆素衍生物,临床上用于治疗类风湿性关节炎和凝血障碍。已有研究表明瑞香素介导的Nrf2抗氧化信号通路可改善叔丁基过氧化氢诱导的线粒体功能障碍和细胞死亡。但瑞香素对庆大霉素肾毒性是否有保护作用,此前尚无报道。
吉林大学第一医院的研究团队就此开展了动物实验和细胞实验。动物实验采用8周龄ICR小鼠,连续7 d腹腔注射庆大霉素(100 mg/kg或200 mg/kg)诱导肾损伤,同时给予瑞香素(20 mg/kg或40 mg/kg)干预,检测血清尿素氮、肌酐、组织病理学变化及氧化应激指标。细胞实验使用小鼠肾小管上皮细胞,以庆大霉素(4 mg/ml)处理,瑞香素(2.5 μm、5 μm、10 μm)预处理1 h,检测细胞活力、活性氧产生和凋亡情况。蛋白表达水平通过蛋白质印迹法检测。
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研究结果
1.瑞香素改善了庆大霉素诱导的肾功能障碍
连续7 d接受200 mg/kg庆大霉素的小鼠,血尿素氮和肌酐水平升高,肾脏组织出现坏死、管型形成、刷状缘缺失、肾小管退化和空泡化等病理改变。瑞香素40 mg/kg治疗显著逆转了这些变化,肾功能恢复明显。
2.瑞香素降低了氧化应激和炎症水平
庆大霉素暴露后,小鼠肾脏的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽水平降低,丙二醛和髓过氧化物酶水平升高。瑞香素预处理逆转了这些变化。蛋白质印迹分析显示,瑞香素显著激活了Nrf2/ARE通路,提高了Nrf2、NQO1、HO-1、GCLC和GCLM的表达水平,同时抑制了庆大霉素诱导的NOX4和NF-κB上调。
3.瑞香素减少了肾组织细胞凋亡
免疫组织化学染色显示,庆大霉素组肾脏的caspase-3蛋白表达增加,瑞香素治疗显著消除了这一影响。蛋白质印迹结果进一步证实,庆大霉素组p53、BAX和裂解的caspase-3明显升高,bcl-2表达降低;瑞香素处理逆转了这些变化。
4.瑞香素保护肾小管上皮细胞免受庆大霉素损伤
在细胞层面,瑞香素预处理剂量依赖性地提高了庆大霉素处理后的细胞存活率,减少了PI阳性细胞和凋亡细胞的数量。瑞香素还显著降低了庆大霉素诱导的细胞内活性氧产生。当加入Nrf2抑制剂后,瑞香素的保护作用被削弱,证实其保护效应依赖于Nrf2的激活。
该研究首次证实天然产物瑞香素通过激活Nrf2调节氧化应激和凋亡,从而保护小鼠免受庆大霉素诱导的肾毒性。Nrf2的药理学激活可能成为预防肾损伤的新策略。
参考文献:
Fan X Y,Gu W J,Gao Y,et al.Daphnetin ameliorated GM-induced renal injury through the suppression of oxidative stress and apoptosis in mice[J].,2021,96:107 601.
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