复方2区-if6.8！江西中医药大学团队揭示滋肾清热利湿化瘀方通过C/EBPβ/STAT3信号传导恢复颗粒细胞稳态改善多囊卵巢综合征

【写在前面】：本期推荐的是由江西中医药大学、江西中医药大学附属医、江西中医药大学妇产科研究所等研究团队合作近期发表于Journal of Ethnopharmacology(IF6.8）的一篇文章，揭示滋肾清热利湿化瘀方通过C/EBPβ/STAT3信号传导恢复颗粒细胞稳态改善多囊卵巢综合征。

【期刊简介】

【题目及作者信息】

Zishen Qingre Lishi Huayu recipe improves polycystic ovary syndrome by restoring granulosa cell homeostasis via C/EBPβ/STAT3 signaling

摘要

多囊卵巢综合征（PCOS）是一种以排卵障碍为特征的多因素内分泌紊乱。滋肾清热利湿化瘀方ZQLHR是一种中药方剂，通过有效提高PCOS患者的排卵率和月经周期规律性，显示出临床疗效，并在实践中得到广泛应用；然而，其潜在的药理机制尚未完全阐明。

研究目的

本研究旨在阐明ZQLHR如何通过C/EBPβ/STAT3信号轴调节PCOS患者卵巢颗粒细胞（GC）的增殖-凋亡平衡。

方法

分析PCOS和非PCOS患者的人颗粒细胞（hGCs）的增殖、凋亡和C/EBPβ/STAT3表达。在体内，对来曲唑诱导的PCOS小鼠进行scAAV介导的C/EBPβ敲除，然后给予ZQLHR以评估治疗结果。在体外，C/EBPβ或STAT3在人颗粒样肿瘤细胞系（KGN）细胞中沉默，以探索它们在增殖和凋亡中的调节关系和作用。此外，以剂量和时间依赖的方式评估了ZQLHR的影响。值得注意的是，CETSA首次被用于确认ZQLHR与C/EBPβ的直接结合，随后用ZQLHR处理C/EBPα沉默的细胞，以检查其作用是否涉及C/EBPγ依赖的STAT3。通过组织学和分子生物学实验进一步评估了ZQLHR的药理机制。

结果

PCOS患者来源的GC表现出增殖减少、凋亡增加和C/EBPβ/STAT3表达降低。在LET诱导的PCOS小鼠中，ZQLHR治疗显著改善了动情周期规律、激素平衡、卵泡发育和GC凋亡，同时调节了C/EBPβ/STAT3通路。C/EBPβ敲除加剧了卵巢功能障碍和KGN凋亡，而ZQLHR减弱了这些作用并部分恢复了通路活性。在体外，C/EBPβ和STAT3相互影响，CFTR表达与增殖和凋亡的变化有关。ZQLHR以剂量和时间依赖的方式增加增殖标志物（PCNA、细胞周期蛋白D1）并减少凋亡标志物（Caspase-3、PARP），CETSA证实其与C/EBPβ直接结合。值得注意的是，尽管C/EBPβ被敲除，ZQLHR仍部分恢复了KGN细胞的增殖，并适度调节了C/EBP？/STAT3信号通路。

结论

ZQLHR通过调节C/EBPβ/STAT3通路改善多囊卵巢综合征的GC稳态并促进卵泡发育。

图文摘要

【前言】

多囊卵巢综合征（PCOS）是育龄妇女中一种常见的内分泌疾病，其特征是慢性无排卵、高雄激素血症和多囊卵巢形态。由于当代生活方式和环境暴露的改变，多囊卵巢综合征的发病率一直在上升。根据最近的流行病学数据，2021年有230万新的多囊卵巢综合征病例，比1990年增加了26.77%。到2021年，全球流行的多囊卵巢综合征病例数已超过6000万。多囊卵巢综合征患者不仅生育能力下降，生活质量下降，还承受着相当大的社会和心理压力，造成了巨大的全球经济负担。在其多种临床表现中，卵泡障碍仍然是不孕的主要原因，改善排卵是临床管理的一大挑战。目前PCOS诱导排卵的治疗主要集中在促进卵泡发育和诱导排卵上，克罗米芬和促性腺激素等药物干预被广泛使用。尽管这些方法大大扩大了治疗的可能性，但某些局限性仍然存在。这些方法往往受到次优疗效、不良反应和卵泡发育缺乏持续改善的限制，这对实现有效的生育结果构成了重大挑战。因此，迫切需要制定一种安全有效的替代新策略。

鉴于GC在卵泡发育中的关键作用以及在PCOS中观察到的其增殖受损和凋亡增加，CCAAT/增强子结合蛋白β（C/EBPβ）和信号转导子和转录激活子3（STAT3）介导的信号通路已成为这一背景下的潜在调节机制。C/EBPβ是C/EBP家族的成员，在包括卵巢在内的各种组织中表达，并调节基因转录以响应细胞因子、激素和炎症信号。在PCOS患者的GC中，C/EBPβ下调，这可能导致GC中观察到的增殖受损和凋亡增加。此外，STAT3是一种由一系列细胞因子和生长因子激活的多功能转录因子，因其在控制细胞生长、存活和免疫反应中的作用而得到广泛认可。值得注意的是，在PCOS患者中，STAT3的表达水平低于对照组，这可能会损害子宫内膜的容受性，从而影响妊娠结局。这些发现共同强调了C/EBPβ/STAT3轴是PCOS发病机制的潜在介质，也是治疗调节的有前景的靶点。

中医药通过多种机制和靶点在多囊卵巢综合征的治疗中显示出显著的疗效。中药滋肾清热利湿化瘀方ZQLHR由山茱萸、知母、黄柏、玄参、白介子、薏苡仁、桃仁、丹参、甘草组成，在临床上显著改善了多囊卵巢综合征。我们之前的研究表明，ZQLHR有效地提高了PCOS患者的排卵率和月经周期规律性，同时改善了痤疮症状并降低了血清睾酮（T）水平。综合iTRAQ蛋白质组学、转录组学和网络药理学分析表明，ZQLHR干预可能会影响多种生物过程，包括炎症、孕酮介导的卵母细胞成熟、凋亡和增殖。在已鉴定的差异表达基因中，C/EBPβ和STAT3成为关键的调控因子。

在本研究中，我们通过研究C/EBPβ/STAT3信号通路在PCOS病理生理学中的作用，并阐明中药ZQLHR的治疗机制，试图填补这些重要空白。结合临床数据分析、PCOS动物模型体内实验和体外细胞实验，我们研究了C/EBPβ/STAT3信号通路在PCOS中的作用以及ZQLHR在调节该通路中的药理作用。此外，我们确定C/EBPβ是PCOS中GC增殖损伤的核心介质，也是ZQLHR治疗效果的关键靶点，可能是通过促进C/EBPα的稳定性。通过将传统草药与当代机械论的见解联系起来，本研究为研究结果的临床翻译提供了基础。

【结果部分】

1.PCOS 患者（n=33-35）GCs细胞中存在增殖与凋亡失衡以及C/ EBPβ /STAT3信号通路抑制现象。

2.ZQLHR 的总离子色谱图（n=3）。

3.ZQLHR 对LET诱导的 PCOS 的影响（n=10）。

4.ZQLHR 对LET诱导的 PCOS 的影响（n=10）。

5.ZQLHR 通过C/ EBPβ /STAT3通路对LET诱导的 PCOS（n=10）中GC细胞凋亡的影响。

6.ZQLHR 对 KGN 细胞增殖、细胞凋亡及C/EBPβ/STAT3信号通路调控的时程与剂量依赖性效应（n=3）。

7.ZQLHR 对 KGN 细胞（n=3）中C/ EBPβ /STAT3通路活性的时间及剂量依赖性影响。

8.siRNA-C/EBPβ对STAT3和CFTR表达以及KGN细胞增殖与凋亡的影响（n=3）。

9.siRNA-STAT3对C/EBPβ和CFTR表达以及KGN 细胞增殖与凋亡的影响（n=3）。

10.C/EBPβ过表达及STAT3挽救对 CFTR 蛋白表达、KGN细胞增殖及凋亡的影响（n=3）。

11.ZQLH在si-C/ EBPβ 干扰条件下对 KGN 细胞增殖、凋亡及C/EBPβ/STAT3信号通路的影响（n=3）。

12.ZQLHR 治疗 PCOS 的调控机制。

【结论与讨论】

总之，本研究表明，ZQLHR有效地调节卵巢颗粒细胞的增殖-凋亡平衡，从而改善PCOS样表型，可能是通过调节C/EBPβ/STAT3信号通路。C/EBPβ的下调加剧了PCOS患者的卵巢功能障碍，突显了其在疾病进展中的关键作用。我们的研究结果还初步揭示了颗粒细胞中C/EBPβ和STAT3之间的相互调节关系。

注：本文原创表明为原创编译，非声张版权，侵删！

中医药基础科研技术服务及加群交流：

相关咨询，加微信：1278317307。

【福利时刻】科研服务（点击查看）：、、、、、。咨询加微信：1278317307。