囊泡运输依赖货物选择性包装,货物能否直接参与衣被组装尚不清楚。2026年9月29日,四川大学苏昭铭和贾大团队完成题为《Cargo crosslinking nucleates AP-1 lattice formation》的研究,解析货物桥接AP-1复合物的冷冻电镜结构,并在体外、细胞和斑马鱼中验证功能。
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研究团队用CI-MPR胞质尾肽段、AP-1、Arf1和clathrin做体外重构,含串联YxxΦ和双亮氨酸基序的野生型肽段明显促进clathrin笼形成,笼直径约126纳米。单独破坏YxxΦ或双亮氨酸基序,或把两个单基序短肽混合,都不能有效促进笼形成。SEC-MALS分析显示,野生型货物肽段形成约726 kDa的AP-1:Arf1:货物三聚体,同时存在单体AP-1峰。他们用P10肽段优化复合物,获得单体2.8 Å、二聚体3.5 Å和三聚体4.0 Å的冷冻电镜结构。二聚体尺寸约200×113×156 ų,三聚体呈扩展三角架构,约200×200×158 ų。
结构显示一条货物肽段同时结合两个相邻AP-1复合物,YxxΦ基序进入一个AP-1的μ1亚基,双亮氨酸基序结合另一个AP-1的σ1相关位点,形成此前未报道的μ1-σ1跨复合物界面。这个界面在二聚体中出现一次,在三聚体中被重复三次,把弱的分立结合转成较稳定的多价组装。μ1的R303、R304和σ1的Y94、F95、G96、S97,以及σ1 E136、E143和μ1 K352参与接触。突变这些残基不破坏AP-1组装和货物结合,却明显降低clathrin笼形成。Arf1 I49D和W172D也降低组装,Δ178-181影响较小。这些结果支持货物桥接AP-1寡聚化,并区别于此前依赖病毒Nef的AP-1三聚体模型。
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细胞实验中,AP-1 μ1或σ1敲除降低CI-MPR、KIAA0319L和ATP7A从内体到TGN的运输,界面缺失突变不能恢复。内源AP1M1 R303E/R304E和K352E敲入HeLa细胞也出现CI-MPR和ATP7A的TGN定位缺陷,K352E表型较轻。斑马鱼ap1m1或ap1s1敲低和F0敲除导致脑形态和HuC阳性神经元发育异常,注射人AP-1 μ1或σ1野生型mRNA可部分恢复,界面突变和患者来源σ1 L90P不能恢复,K352E保留部分恢复能力。研究团队提出货物桥接AP-1寡聚化是生理性AP-1晶格组装的关键环节,与衣被内在界面和GTP酶调控共同作用。
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