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脓毒症可导致多器官功能障碍，血管内皮细胞损伤是其中的重要病理环节，相关分子机制仍需明确。近日，中国药科大学寇俊萍团队和东南大学附属中大医院刘松桥团队完成了题为《USP28 potentiates endothelial necroptosis via deubiquitinating NMMHC IIA in septic male mice》的研究。他们用循环内皮细胞纳米蛋白质组学、内皮特异性基因修饰小鼠和原代内皮细胞实验，分析USP28在脓毒症内皮坏死性凋亡和多器官损伤中的作用及下游机制。
研究团队分析了脓毒症患者循环内皮细胞，发现内皮USP28水平升高，并且与SOFA评分呈正相关。小鼠CLP模型中肺、肠、肝和肾内皮USP28随时间升高，内皮特异性敲除USP28改善了生存率和体温下降，减轻多器官病理损伤、组织水肿和血管渗漏，血浆IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-α/β以及CRP、CK、BUN、ALT、LDH水平降低。USP28抑制剂AZ-1在CLP前或后给药均产生保护作用，内皮USP28敲低后AZ-1不再增加保护，内皮USP28过表达则加重损伤和死亡。
单细胞RNA测序显示，USP28缺失改变了脓毒症肺内皮亚群，IFN-I信号和坏死性凋亡相关转录特征在动脉、静脉和毛细血管内皮中富集，淋巴内皮变化不明显。CLP后肺内皮IFNAR1、pSTAT1、ZBP1、pRIPK1、pRIPK3和pMLKL升高，USP28缺失降低这些蛋白，USP28过表达加重升高。IFN-β刺激内皮细胞后，USP28沉默改善细胞活力、跨内皮电阻和Evans blue渗漏，降低坏死性凋亡蛋白，USP28过表达则相反；GSDMD和cleaved caspase-3没有明显变化，沉默MLKL或RIPK3可阻断IFN-β诱导的细胞死亡。内皮IFNAR1过表达消除了USP28缺失的保护作用。
免疫沉淀质谱发现NMMHC IIA是与USP28互作的主要蛋白，USP28的泛素C端水解酶域和NMMHC IIA的C端域介导结合。USP28去除NMMHC IIA的K48连接泛素链，主要位点为K1413，USP28沉默促进NMMHC IIA降解，USP28过表达稳定NMMHC IIA。NMMHC IIA与IFNAR1结合，N端和头部域与IFNAR1胞质域参与，NMMHC IIA沉默或抑制减少IFNAR1膜表达并增加内化，NMMHC IIA过表达增强膜转运。内皮NMMHC IIA过表达逆转USP28缺失的保护，IFN-I/STAT1信号转录上调USP28并形成正反馈，研究团队将USP28-NMMHC IIA轴列为脓毒症内皮损伤的潜在干预靶点。
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