J Ethnopharmacol (IF=6.8)｜芎芷祛风止痛颗粒抗慢性偏头痛：靶向HMGB1/TRPV1/MAPK轴，缓解痛觉过敏与中枢神经炎症！(丁选胜/韩冰团队)

2026年7月3日，中国药科大学基础医学与临床药学院丁选胜教授团队，联合黑龙江济仁药业韩冰团队，在Journal of Ethnopharmacology （中科院2区，IF=6.8）在线发表题为 “Xiongzhi Qufeng Zhitong Granule alleviates nitroglycerin-induced migraine-like nociception and central neuroinflammation by regulating the HMGB1 / TRPV1 / MAPK signaling axis” 的研究论文。该文于2026年4月23日投稿，2026年6月22日修回，2026年6月30日接收。

慢性偏头痛（chronic migraine，CM）是一类具有高度致残性的神经炎症相关疾病，现有治疗仍存在疗效持续时间有限、不良反应影响依从性等问题。芎芷祛风止痛颗粒（Xiongzhi Qufeng Zhitong Granules，XZQF）来源于临床中药处方，由川芎、白芷、柴胡、石菖蒲、远志、葛根和藁本组成，已在临床应用多年，但其抗偏头痛作用及分子机制尚未被系统阐明。

该研究采用硝酸甘油（nitroglycerin，NTG）诱导的慢性偏头痛大鼠模型，结合行为学检测、Von Frey痛阈检测、甩尾潜伏期（tail-flick latency，TFL）检测、ELISA、H&E染色、网络药理学、分子对接、免疫荧光、免疫组化和Western blot等方法，系统评价XZQF对偏头痛样行为、痛觉过敏、三叉神经脊束核尾侧亚核（trigeminal nucleus caudalis，TNC）脑组织损伤以及中枢神经炎症的影响。

结果显示，XZQF可提高NTG诱导CM大鼠的足底和眶周痛阈及TFL，减少抓头、爬笼等偏头痛样行为；降低血清和TNC脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、CGRP、VIP、iNOS、NO等炎症/疼痛/血管活性相关指标，同时恢复IL-10、β-EP和5-HT水平。机制上，XZQF可下调TNC脑组织中CGRP、TRPV1、c-Fos、COX-2和HMGB1表达，并抑制MEK/MAPK磷酸化，提示其抗CM作用可能与调控HMGB1/TRPV1/MAPK信号轴有关。

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【摘 要】

民族药理学相关性：慢性偏头痛（chronic migraine，CM）是一种患病率较高的神经炎症性疾病，现有治疗选择仍然有限。芎芷祛风止痛颗粒（Xiongzhi Qufeng Zhitong Granules，XZQF）是一种临床使用的传统中药制剂，显示出较好的抗偏头痛潜力和安全性特征；然而，其系统疗效及潜在机制仍未充分明确。

研究目的：本研究旨在探讨XZQF对硝酸甘油（NTG）诱导的CM大鼠模型的保护作用，并围绕HMGB1/TRPV1/MAPK信号通路揭示其潜在机制。

材料与方法：研究首先建立CM大鼠模型，并通过行为学检测、酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）和组织病理学染色分析评估XZQF对CM的作用。随后，研究结合网络药理学分析、免疫荧光、免疫组织化学和Western blot，进一步验证XZQF调控HMGB1/TRPV1/MAPK信号轴以对抗CM的分子机制。

结果：行为学实验、ELISA检测和组织病理学评估共同显示，XZQF可显著维持体重状态并恢复痛阈，降低血清和脑组织中促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α，以及PGE2、CGRP、VIP、NO、iNOS等疼痛和血管活性相关介质水平，同时减轻偏头痛相关脑组织损伤。网络药理学鉴定出STAT3、NFKB1、JUN、PTGS2、IL1B等核心靶点，以及阿魏酸、洋川芎内酯E/F、新蛇床内酯、甲基丁香酚等关键活性成分；富集分析提示其可能涉及MAPK、PI3K-Akt和cAMP等信号通路。免疫荧光、免疫组化和Western blot进一步验证，XZQF可显著抑制CGRP、TRPV1、c-Fos、COX-2和HMGB1表达，并降低MEK和MAPK的磷酸化水平。

结论：上述结果表明，XZQF可通过抑制HMGB1/TRPV1/MAPK信号轴介导的中枢神经炎症，对CM发挥镇痛、抗炎和血管调节作用。本研究为理解XZQF抗CM活性建立了机制框架，并支持其作为CM干预药物开展进一步研究。

01

研究背景及科学问题

慢性偏头痛是一种致残性神经系统疾病，以反复头痛发作为主要特征，发病机制复杂。临床上，CM通常定义为每月头痛发作超过15天，并持续至少3个月。其临床表现包括单侧或双侧中重度搏动性疼痛，体力活动后加重，发作可持续4至72小时，并常伴有畏光、畏声、恶心或呕吐。近年来，CM发生率呈上升趋势，给医疗系统和家庭带来显著社会经济负担。目前，非特异性镇痛药和偏头痛特异性药物仍是主要一线治疗选择，但疗效持续时间有限以及不良反应问题影响长期治疗依从性，因此有必要寻找新的治疗药物。

偏头痛在中医中有较早记载，常归属于“头风”范畴，表现为反复、剧烈的单侧或双侧头痛，起病和缓解较突然，并可伴随周期性呕吐或腹痛。XZQF来源于国医大师陆放教授的临床处方，已在临床使用多年。该方由7味药组成：川芎（Chuanxiong，Ligusticum chuanxiong Hort，CX，25 g）、白芷（Bai Zhi，Angelica dahurica (Hoffm.)，BZ，5 g）、柴胡（Chai Hu，Bupleuri Radix，CH，5 g）、石菖蒲（Shi Chang Pu，Acorus Tatarinowii Rhizoma，SCP，2.5 g）、远志（Yuan Zhi，Radix Polygalae，YZ，2.5 g）、葛根（Ge Gen，Pueraria lobata (Willd.) Ohwi，GG，2.5 g）和藁本（Gao Ben，Ligustici Rhizoma et Radix，GB，2.5 g）。该方具有祛风活血、化瘀止痛之功，用于针对“风邪上扰、瘀阻脑络”所对应的持续反复头痛、局部疼痛和刺痛等CM相关表现。

方中川芎载于《神农本草经》，因其活血、行气、祛风、止痛作用而被用于头痛治疗。现代研究也提示川芎具有心血管和神经保护、抗炎、抗糖尿病、抗骨质疏松、抗菌、抗衰老、抗氧化和免疫调节等多种药理活性。白芷和柴胡在临床应用历史悠久，在XZQF中被视为臣药。白芷在《本草纲目》中被记载具有“祛风止痛”作用，尤其适用于风寒头痛，并可用于感冒、头痛和牙痛。石菖蒲与远志作为佐药，可协同交通心肾、益智开窍；葛根和藁本作为引经药，其中藁本用于巅顶痛，葛根用于项背强痛，可帮助引导其他药物至相关经络。总体来看，这些证据支持XZQF用于CM治疗具有一定中医理论基础，但其抗偏头痛分子机制仍需进一步研究。

偏头痛发病机制复杂，涉及神经血管功能障碍、神经递质失衡，例如5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）和降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP），以及遗传易感性和离子通道异常等。现有研究表明，三叉神经脊束核尾侧亚核（TNC）区域神经元兴奋所导致的中枢敏化，是CM发生发展的重要环节。高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1，HMGB1）是一种广泛表达的核蛋白，在细胞损伤或炎症诱导后释放至细胞外，可发挥促炎刺激作用。HMGB1还能激活Toll样受体（Toll-like receptors，TLRs）和晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end products，RAGE），促进神经元、胶质细胞和免疫细胞之间相互作用，最终参与神经源性炎症。

瞬时受体电位香草酸亚型1（transient receptor potential vanilloid 1，TRPV1）是瞬时受体电位通道蛋白家族成员，也是一种非选择性阳离子通道，可感知高温或辣椒素等诱导的损伤刺激，并参与疼痛感知和传递。TRPV1被认为在偏头痛发作过程中具有重要信号调控作用。研究显示，TRPV1在感觉损伤性神经纤维，尤其是质膜中高度表达，慢性偏头痛患者三叉神经纤维中的TRPV1表达也升高。TRPV1可促进神经源性炎症和伤害性感受信号传导，并激活PI3K-AKT和MAPK等下游通路，从而增加CGRP、P物质（substance P，SP）、TNF-α、IL-1β等炎症和疼痛相关因子的产生。

值得注意的是，在中枢神经系统中，TRPV1激活可升高HMGB1表达；反过来，二硫键型HMGB1也可通过NF-κB依赖方式上调TRPV1，从而放大机械性痛敏。总体来看，偏头痛或CM诱导的HMGB1和TRPV1激活，可能进一步介导PI3K-AKT和MAPK信号表达，加重神经源性炎症和敏化，促进炎症因子和疼痛相关因子表达，最终导致中枢痛觉过敏和异常性疼痛。因此，作者提出假设：HMGB1、TRPV1及其相关MAPK信号在CM中具有重要作用，而XZQF可能通过调控HMGB1、TRPV1和MAPK信号通路发挥治疗CM的作用。

02

重要发现及亮点

XZQF质量标准特征图谱的建立

研究首先基于高效液相色谱（high-performance liquid chromatography，HPLC）建立XZQF质量标准特征图谱。分析结果显示，XZQF供试品色谱图应呈现11个特征峰，其中以参照物保留时间对应峰作为峰8（s）。各特征峰相对于峰8（s）的相对保留时间应位于规定值±10%范围内，具体包括峰1为0.378、峰2为0.561、峰3为0.631、峰4为0.677、峰5为0.696、峰6为0.722、峰7为0.835、峰9为1.718、峰10为1.905、峰11为1.982。图中标注显示，峰3为葛根素（puerarin），峰8s为阿魏酸（ferulic acid），峰10为oxypeucedanin hydrate。为进一步完善并验证质量标准图谱，研究者检测了4批XZQF中试样品，结果显示4批样品中的色谱峰与已建立的质量标准图谱峰位一一对应，提示批间一致性较好。

图1：XZQF质量标准图谱的建立。（A）XZQF样品质量标准图；（B）4批XZQF中试样品的色谱图。注：本图中，S1代表XZQF中试样品批号20250601的色谱图，S2代表XZQF中试样品批号20250602的色谱图，S3代表XZQF中试样品批号20250603的色谱图，S4代表XZQF中试样品批号20250604的色谱图。

XZQF改善NTG诱导CM大鼠的偏头痛样行为并提高痛阈

研究采用NTG诱导建立CM大鼠模型，用于评价XZQF疗效。大鼠分为对照组、模型组、XZQF低剂量组（XZQF-L，1.4397 g/kg）、XZQF中剂量组（XZQF-M，2.8793 g/kg）、XZQF高剂量组（XZQF-H，5.7586 g/kg）、正天丸组（Zhengtianwan，ZTW，1.8510 g/kg）和布洛芬组（0.0823 g/kg）。除对照组和模型组给予等体积0.5% CMC-Na外，其余组每日灌胃给药1次，连续21天。给药第6天后，除对照组外，其余大鼠隔日腹腔注射NTG（10 mg/kg），共5次，以建立CM样模型。

结果显示，各组大鼠体重、平均摄食量和饮水量无明显差异。XZQF给药后，心、肝、脾、肺、肾、脑和胸腺等脏器系数也未较模型组出现明显改变，提示在该实验条件下未观察到明显系统性毒性信号。

图2：XZQF对NTG刺激CM大鼠体重、摄食量、饮水量及脏器指数的影响和研究设计（n=10）。（A）研究流程。（B–D）XZQF对大鼠体重、摄食量和饮水量的影响。（E–K）XZQF对大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑重量和胸腺等脏器系数的影响。对照组和模型组之间采用Student’s t检验分析，多组比较采用ANOVA分析。数据以均值±标准差（Mean ± SD）表示。XZQF-L：芎芷祛风止痛颗粒低剂量组；XZQF-M：芎芷祛风止痛颗粒中剂量组；XZQF-H：芎芷祛风止痛颗粒高剂量组；ZTW：正天丸；NTG：硝酸甘油。

行为学结果显示，NTG注射后，模型大鼠出现抓头、爬笼、畏光等典型偏头痛样行为。与对照组相比，模型组大鼠足底痛阈、眶周痛阈和TFL均显著降低，提示其出现痛觉过敏和偏头痛样痛觉反应。XZQF处理可剂量依赖性提高足底和眶周痛阈，并延长TFL，同时减少偏头痛样行为。正天丸和布洛芬也可改善NTG刺激大鼠的痛阈和偏头痛样行为。比较而言，XZQF在改善痛阈、TFL和偏头痛样行为方面表现出优于两个阳性对照药物的趋势。

图3：XZQF改善NTG诱导CM大鼠足底和眶周痛阈、TFL以及偏头痛样行为的作用（n=10）。（A）XZQF在给药干预第9、15和21天对足底痛阈的改善作用。（B）XZQF在给药干预第9、15和21天对眶周痛阈的改善作用。（C）给药干预第9、15和21天TFL的升高情况。（D）XZQF在给药干预第6、9、12、15、17和21天对偏头痛样行为的改善作用，上述时间点定义为测试1至测试6。（E–J）XZQF在给药期间测试1至测试6对大鼠偏头痛样抓头行为评分的影响。对照组和模型组之间采用Student’s t检验分析，多组比较采用ANOVA分析。数据以均值±标准差表示。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001 vs. 对照组；<0.05，#<0.01，##<0.001，###<0.0001 vs. 模型组。XZQF-L：芎芷祛风止痛颗粒低剂量组；XZQF-M：芎芷祛风止痛颗粒中剂量组；XZQF-H：芎芷祛风止痛颗粒高剂量组；ZTW：正天丸。

XZQF改善NTG导致的TNC脑组织损伤

为进一步观察CM模型相关脑组织病理改变，研究者对TNC脑组织进行H&E染色。对照组神经元排列较为整齐，边界清晰，未见明显结构破坏。相反，NTG诱导模型组表现为神经元数量减少、炎症细胞浸润、细胞肿胀和排列紊乱，并可见较广泛空泡样改变。XZQF干预后，模型相关组织病理损伤减轻，表现为炎症细胞浸润减少、纤维化程度下降，以及神经元细胞间隙空泡减少。正天丸和布洛芬阳性对照组同样显示减轻NTG诱导TNC脑组织损伤的作用。

图4：XZQF对NTG刺激CM大鼠TNC脑组织病理学改变的分析（n=10）。（A）对照组TNC脑组织代表性H&E染色结果。（B）NTG诱导模型组TNC脑组织代表性H&E染色结果。（C–E）XZQF-L、XZQF-M和XZQF-H组TNC脑组织代表性H&E染色结果。（F–G）ZTW和布洛芬阳性药物组TNC脑组织代表性H&E染色结果。（H）各组H&E染色评分评价。对照组和模型组之间采用Student’s t检验分析，多组比较采用ANOVA分析。数据以均值±标准差表示。***P<0.001，****P<0.0001 vs. 对照组；<0.05，###<0.0001 vs. 模型组。XZQF-L：芎芷祛风止痛颗粒低剂量组；XZQF-M：芎芷祛风止痛颗粒中剂量组；XZQF-H：芎芷祛风止痛颗粒高剂量组；ZTW：正天丸。

XZQF调节血清和TNC脑组织中的炎症因子、疼痛介质和血管活性介质

研究进一步检测血清和TNC脑组织中炎症因子、疼痛相关介质和血管活性介质。结果显示，与对照组相比，模型组血清和TNC脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α和PGE2水平显著升高；抗炎因子IL-10、镇痛相关介质β-EP以及5-HT水平下降。同时，CGRP、VIP、iNOS和NO等血管活性相关介质在血清和TNC脑组织中也显著升高。

XZQF给药后，IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2以及CGRP、VIP、iNOS、NO等指标在血清和TNC脑组织中均显著下降；同时，IL-10、β-EP和5-HT水平升高。正天丸和布洛芬也对上述指标表现出调节作用。整体来看，XZQF在改善这些炎症、疼痛和血管活性相关指标方面与布洛芬和正天丸相近，并在β-EP、5-HT和CGRP等部分参数上表现出一定优势。

图5：XZQF对NTG刺激大鼠血清和TNC脑组织中促炎因子及疼痛相关介质表达的影响（n=10）。（A–D）XZQF对NTG诱导大鼠血清和TNC脑组织中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及抗炎介质IL-10表达的影响。（E–G）XZQF对NTG诱导大鼠血清和TNC脑组织中疼痛相关指标PGE2、β-EP和5-HT表达的影响。（H–K）XZQF对NTG诱导大鼠血清和TNC脑组织中血管活性相关介质CGRP、VIP、iNOS和NO表达的影响。对照组和模型组之间采用Student’s t检验分析，多组比较采用ANOVA分析。数据以均值±标准差表示。****P<0.0001 vs. 对照组；<0.05，#<0.01，##<0.001，###<0.0001 vs. 模型组。XZQF-L：芎芷祛风止痛颗粒低剂量组；XZQF-M：芎芷祛风止痛颗粒中剂量组；XZQF-H：芎芷祛风止痛颗粒高剂量组；ZTW：正天丸。

图6：XZQF对NTG刺激大鼠血清和TNC脑组织中疼痛相关介质及血管活性介质表达的影响（n=10）。（A）XZQF对NTG诱导大鼠血清和TNC脑组织中疼痛相关指标5-HT表达的影响。（B–E）XZQF对NTG诱导大鼠血清和TNC脑组织中血管活性相关介质CGRP、VIP、iNOS和NO表达的影响。对照组和模型组之间采用Student’s t检验分析，多组比较采用ANOVA分析。数据以均值±标准差表示。****P<0.0001 vs. 对照组；<0.05，#<0.01，##<0.001，###<0.0001 vs. 模型组。XZQF-L：芎芷祛风止痛颗粒低剂量组；XZQF-M：芎芷祛风止痛颗粒中剂量组；XZQF-H：芎芷祛风止痛颗粒高剂量组；ZTW：正天丸。

网络药理学预测XZQF治疗CM的活性成分和潜在靶点

为探索XZQF抗CM的潜在机制，研究者采用网络药理学方法进行分析。经数据库检索和筛选，共鉴定出104个活性成分，其中川芎20个、白芷28个、柴胡13个、远志5个、石菖蒲18个、葛根4个、藁本16个。整合去重后，共预测到861个XZQF治疗CM的潜在靶点。与此同时，研究者整合获得3711个CM疾病靶点，并通过Venn分析得到422个XZQF治疗CM的交集靶点。PPI分析显示，STAT3、BCL2、JUN、MMP9、NFKB1、CASP3、ALB、AKT1、SRC、PTGS2、EGFR、IL1B、BCL2L1、CXCL8等位于前20位，可被视为XZQF改善CM的核心靶点。

图7：CM疾病靶点、XZQF治疗CM预测靶点，以及XZQF-CM共同靶点的PPI分析。（A）分别来自GeneCards、OMIM和DrugBank的CM预测靶点。（B）XZQF治疗CM的交集靶点。（C）XZQF治疗CM共同靶点的PPI分析。XZQF：芎芷祛风止痛颗粒；CM：慢性偏头痛。

为进一步筛选XZQF治疗CM的关键成分，研究者构建“方剂-成分-靶点”综合互作网络。该网络包含508个节点和3889条边。根据度值排序，筛选出洋川芎内酯E、洋川芎内酯F、阿魏酸、新蛇床内酯、甲基丁香酚、β-谷甾醇、洋川芎内酯A、(Z)-丁烯基苯酞、(E)-藁本内酯、Mandenol、细辛醚、洋川芎内酯C/I、Levistolide A、1,7-二甲氧基咫吨酮、Wallichilide、欧前胡素类成分等前20个候选关键成分。

GO功能和KEGG通路富集分析显示，XZQF治疗CM的共同靶点主要富集于信号转导、RNA聚合酶II介导转录正调控、基因表达正调控、G蛋白偶联受体信号通路、细胞群体增殖正调控、凋亡过程负调控以及炎症反应等生物过程；细胞组分主要涉及质膜、胞质溶胶、细胞质、膜、核质和细胞外外泌体等；分子功能主要包括蛋白结合、同源蛋白结合、ATP结合、金属离子结合、蛋白激酶活性和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性等。KEGG通路方面，交集靶点主要集中于癌症通路、神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、PI3K-Akt信号通路、阿尔茨海默病、MAPK信号通路、cAMP信号通路以及脂质与动脉粥样硬化等。

图8：GO功能和KEGG通路富集分析。（A）GO功能中排名前20位的生物过程（biological process，BP）富集结果；（B）GO功能中排名前20位的细胞组分（cellular component，CC）富集结果；（C）GO功能中排名前20位的分子功能（molecular function，MF）富集结果；（D）排名前20位的KEGG通路富集结果。

分子对接进一步显示，除甲基丁香酚与NFKB1之间结合能为−4.9 kcal/mol外，所选关键成分与核心靶点之间的对接结合能均低于−5.0 kcal/mol，提示具有较好的结合潜力。研究还考察了5个关键成分与c-Fos、CGRP、HMGB1、PTGS2和TRPV1等靶点的结合能力，结果显示其与相关靶点具有较高对接能量。总体来看，这些结果提示，XZQF可能通过多成分协同作用调节核心靶点表达，从而发挥抗CM作用。

图9：代表性化合物洋川芎内酯E、洋川芎内酯F、阿魏酸、新蛇床内酯和甲基丁香酚分别与核心靶点c-Fos、CGRP、HMGB1、PTGS2以及TRPV1的分子对接结果可视化。

XZQF调控NTG诱导CM大鼠TNC脑组织中CGRP、TRPV1、COX-2、c-Fos、5-HT1B和HMGB1表达

基于网络药理学和分子对接结果，研究者进一步采用免疫荧光和免疫组化验证XZQF对关键蛋白的调控。免疫荧光结果显示，与模型组相比，XZQF组TNC脑组织中CGRP和TRPV1表达呈剂量依赖性下降。正天丸和布洛芬阳性对照组中CGRP和TRPV1表达也较模型组下降。

图10：免疫荧光评价XZQF对NTG刺激大鼠TNC脑组织中CGRP和TRPV1蛋白表达的影响。（A）XZQF对CGRP蛋白表达的影响；（B）XZQF对TRPV1蛋白表达的影响（n=3）。XZQF-L：芎芷祛风止痛颗粒低剂量组；XZQF-M：芎芷祛风止痛颗粒中剂量组；XZQF-H：芎芷祛风止痛颗粒高剂量组；ZTW：正天丸。（比例尺：25 μm，40×）。

免疫组化结果显示，与模型组相比，XZQF干预后TNC脑组织中COX-2和c-Fos表达降低，提示其镇痛作用可能与抑制COX-2和c-Fos表达有关。同时，模型组TNC脑组织中5-HT1B和HMGB1表达低于对照组，而XZQF干预后两者表达呈升高趋势，提示XZQF可能改善NTG诱导的相关分子耗竭或功能异常。正天丸和布洛芬也能显著改善上述靶点表达变化。总体而言，这些结果表明，XZQF抗CM机制与调控TNC脑组织中CGRP、TRPV1、COX-2、c-Fos、5-HT1B和HMGB1表达有关。

图11：免疫组织化学检测XZQF对TNC脑组织中COX-2、c-Fos、5-HT1B和HMGB1蛋白表达的影响。（A）XZQF对COX-2蛋白表达的影响；（B）XZQF对c-Fos蛋白表达的影响；（C）XZQF对5-HT1B蛋白表达的影响；（D）XZQF对HMGB1蛋白表达的影响（n=3）。XZQF-L：芎芷祛风止痛颗粒低剂量组；XZQF-M：芎芷祛风止痛颗粒中剂量组；XZQF-H：芎芷祛风止痛颗粒高剂量组；ZTW：正天丸。（比例尺：25 μm，40×）。

XZQF通过调控HMGB1/TRPV1/MAPK信号通路缓解CM

Western blot结果显示，与对照组相比，NTG注射后模型组TNC脑组织中HMGB1、COX-2、CGRP、TRPV1、c-Fos、cAMP、p-MEK和p-MAPK蛋白表达升高。XZQF干预后，这些蛋白表达均显著下降。正天丸处理可显著降低HMGB1、COX-2、CGRP、c-Fos和p-MAPK蛋白表达，但对TRPV1、cAMP和p-MEK表达降低不明显；布洛芬可降低HMGB1、COX-2、TRPV1、c-Fos、cAMP、p-MEK和p-MAPK蛋白表达，但对CGRP蛋白表达无明显影响。相比之下，XZQF对这些靶点表现出更全面的调节作用。总体而言，XZQF抗CM的潜在机制与调控HMGB1/TRPV1/MAPK信号通路密切相关。

图12：Western blot检测XZQF对NTG诱导CM大鼠TNC脑组织中HMGB1、COX-2、CGRP、TRPV1、c-Fos、cAMP、MEK、p-MEK、MAPK和p-MAPK蛋白表达的影响。对照组和模型组之间采用Student’s t检验分析，多组比较采用ANOVA分析。数据以均值±标准差表示。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001 vs. 对照组；<0.05，#<0.01，##<0.001，###<0.0001 vs. 模型组（n=3）。XZQF-L：芎芷祛风止痛颗粒低剂量组；XZQF-M：芎芷祛风止痛颗粒中剂量组；XZQF-H：芎芷祛风止痛颗粒高剂量组；ZTW：正天丸。

机制示意图总结

综合行为学、组织病理学、网络药理学、分子对接和分子生物学验证结果，研究提出：NTG诱导CM后，可激活TNC区域神经炎症和疼痛信号，导致HMGB1、TRPV1、CGRP、COX-2、c-Fos、cAMP及MEK/MAPK磷酸化上调，并伴随促炎因子、疼痛介质和血管活性介质紊乱。XZQF可通过抑制HMGB1/TRPV1/MAPK信号轴，降低IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、CGRP、VIP、NO和iNOS等相关因子，恢复IL-10、β-EP和5-HT水平，从而缓解中枢神经炎症、痛觉过敏和偏头痛样行为。

图13：XZQF通过HMGB1/TRPV1/MAPK通路改善NTG诱导慢性偏头痛大鼠的神经炎症和疼痛的机制示意图。

【贡献】★★★★★

本研究证实，XZQF可显著缓解NTG诱导慢性偏头痛大鼠的异常性疼痛和神经炎症，并下调促炎、血管活性和疼痛相关因子。网络药理学分析和分子验证实验均提示，XZQF的抗CM作用与调控HMGB1/TRPV1/MAPK通路有关。此外，在该动物实验条件下，XZQF表现出较好的安全性，使其成为慢性偏头痛治疗候选药物的潜在研究对象。总体而言，这些结果为开发XZQF作为CM临床治疗药物提供了实验依据，也为理解其抗CM机制提供了新思路。

需要注意的是，作者在讨论中也指出，本研究仍存在一些局限。首先，目前结果主要来自动物体内模型，仍需要补充体外研究以解析细胞类型特异性机制。其次，炎症、疼痛和血管活性介质的定量主要依赖ELISA，未来可结合流式细胞术、单分子成像等正交技术加强验证。此外，网络药理学分析中的分子对接和活性成分预测结果仍需通过体外细胞模型等确认实验进一步验证。未来结合蛋白质组学、代谢组学、高通量测序，以及基因敲除/回补实验，将有助于更全面阐明XZQF治疗CM的机制图谱。

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